ПОСТОЯННЫЙ КОМИТЕТ ПО КОНТРОЛЮ НАРКОТИКОВ
УТВЕРЖДЕНЫ
Постоянным комитетом
по контролю наркотиков
18 августа 1994 г.,
Протокол N 32
МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
КРИМИНАЛИСТИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ОПИЙНОГО И
МАСЛИЧНОГО MAKOB <*>
--------------------------------
<*> Разработчики: А.В.Гаевский, Е.В.Коваленко (НПО "ВИЛАР"),
В.Г.Савенко, Е.П.Семкин, В.И.Сорокин (ЭКЦ МВД РФ).
МЕТОДИКА ЭКСПЕРТНОГО ИССЛЕДОВАНИЯ
Принцип химической диагностики снотворного мака основан на
обнаружении с помощью тонкослойной хроматографии на силикагеле
алкалоидов наркотолина, наркотина и ретикулина:
- при наличии наркотолина либо при полном отсутствии наркотина
и наркотолина образец относят к маку масличному;
- при наличии значительного количества наркотина (более 15-20%
от морфина) и полном отсутствии наркотолина образец относят к маку
опийному;
- при наличии ретикулина образец относят к украинским сортам
масличного мака. (Этот признак используется в качестве
дополнительного.)
Для обнаружения наркотолина, ретикулина и других фенольных
алкалоидов мака снотворного авторами разработан способ проявления
хроматографических пластинок раствором стабилизированной соли
диазония - прочного синего Б, ранее применявшийся только для
обнаружения каннабиноидов. Этот способ существенно повышает
чувствительность и селективность анализа и в сочетании с реактивом
Драгендорфа позволяет однозначно идентифицировать наркотолин и
ретикулин без применения эталонных веществ.
Правомочность применения предлагаемого принципа химической
диагностики и его методического решения подтверждена в процессе
серийной оценки образцов мировой коллекции мака, а также местных
форм из различных районов страны.
Предлагаемая методика анализа образцов мака состоит из этапов:
экстракции алкалоидов хлороформом, количественного (или
полуколичественного) определения морфина любым общепринятым
методом и последующего обнаружения сопутствующих морфину
алкалоидов (наркотолина, наркотина, ретикулина) с помощью
тонкослойной хроматографии.
Перед началом исследования необходимо выяснить, относится ли
представленное на исследование растение к маку снотворному. Для
этого методом тонкослойной хроматографии определяют наличие в
исследуемом объекте морфина, кодеина, тебаина. Наличие этого
комплекса признаков позволяет отнести растение к маку снотворному.
Подготовка проб для анализа. Исследуемый объект измельчают до
размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром
1 мм. Влажную солому мака предварительно высушивают в сушильном
шкафу (желательно с принудительной вентиляцией) при температуре
50-60 град. C.
Затем 2 г измельченной растительной массы помещают в
коническую колбу вместимостью 200 мл с пришлифованной пробкой,
приливают 5,0 мл 5% раствора карбоната калия, тщательно
перемешивают до равномерного увлажнения и оставляют на 15 мин. для
набухания, после чего приливают 100 мл хлороформа, колбу закрывают
пробкой и в течение 30 мин. встряхивают на качалке или
перемешивают магнитной мешалкой. Прилипшие к стенкам колбы
растительные частицы периодически погружают в раствор стеклянной
палочкой с плоским концом. Полученный экстракт фильтруют через
небольшой ватный фильтр в плоскодонную колбу. Первые 3-4 мл
фильтрата отбрасывают. Порцию фильтрата объемом 20 мл, что
соответствует 0,4 г сырья, переносят в маленькую круглодонную
колбу и отгоняют растворитель досуха с вакуумом при температуре
водяной бани 45-50 град. C. Эту пробу используют для проведения
дифференциации: 40 мл фильтрата используют для количественного
определения морфина.
Методика определения. Перед началом определения необходимо
установить содержание морфина в растительном сырье. Для этого
можно применять любой из известных методов:
газохроматографический, метод высокоэффективной жидкостной
хроматографии, метод полуколичественного определения морфина. С
этой целью две порции хлороформного экстракта из соломы мака
объемом по 10 мл (что соответствует 0,2 г сырья) помещают в
круглодонные колбы и отгоняют растворитель досуха. Сухой остаток в
одной колбе растворяют в 5 мл метанола (хлороформа), во второй - в
2,5 мл.
На стартовую линию пластинки размером 10 x 10 см с нейтральным
слоем силикагеля наносят приготовленные растворы в количествах,
указанных в табл. 1. Диаметр пятен на старте при нанесении не
должен превышать 3 мм. Для каждого разведения наносят не менее
двух серий пятен. После полного высыхания пятен пластинку
хроматографируют в смеси растворителей толуол - ацетон - этанол -
аммиак (25%) (45:45:6:2), затем высушивают под тягой в течение
30-40 мин. до полного исчезновения запаха аммиака. Пластинку
опрыскивают реактивом Драгендорфа и отмечают минимальные объемы
нанесенных на пластинку проб, при которых четко проявляются пятна
морфина. По табл. 1 находят соответствующее содержание морфина в
образце (в процентах).
Таблица 1
Содержание морфина в растительном сырье в зависимости
от объема нанесенного экстракта
----------------------------------T-------------------------------
|Количество раствора на пластинке,|Содержание морфина в сырье, % |
| мкл | |
+---------------------------------+------------------------------+
|Разведение 5 мл | |
| 2,5 | 1,00 |
| 3,0 | 0,80 |
| 3,5 | 0,70 |
| 4,0 | 0,60 |
| 4,5 | 0,55 |
| 5,0 | 0,50 |
+---------------------------------+------------------------------+
|Разведение 2,5 мл | |
| 2,5 | 0,50 |
| 3,0 | 0,40 |
| 3,5 | 0,35 |
| 4,0 | 0,30 |
| 5,0 | 0,25 |
| 6,0 | 0,20 |
| 8,0 | 0,15 |
| 12,0 | 0,10 |
L---------------------------------+-------------------------------
Если при различном разведении пробы или разных повторностях на
пластинках будут получены разные показатели содержания морфина в
образце, результаты усредняют.
После получения показателей содержания морфина пробу,
предназначенную для обнаружения наркотина, наркотолина и
ретикулина, растворяют в различных объемах смеси метанола с
хлороформом (3:1) либо в чистом хлороформе. Объем растворителя
выбирается в зависимости от содержания морфина в испытуемом
образце (табл. 2). Полученные растворы наносят на пластинки в
количестве, указанном в той же таблице.
Таблица 2
Объем пробы, необходимой для нанесения на
хроматографическую пластину, в зависимости
от содержания морфина в растительном сырье
-------------T----------------------------------------------------
| Содержание | Объем |
| морфина +-----------------------T---------------------------+
|в образце, %|для растворения сухого |для нанесения на пластинку,|
| | остатка, мл |мкл |
| +-----------T-----------+-----------T---------------+
| |наркотолин,| ретикулин |наркотолин,| ретикулин |
| |наркотин | |наркотин | |
+------------+-----------+-----------+-----------+---------------+
| 0,1 | 1,0 | 0,5 | 8,8 | 12,0 |
| 0,15 | | | 5,8 | 9,0 |
+------------+-----------+-----------+-----------+---------------+
| 0,20 | 2,0 | 1,0 | 8,8 | 12,0 |
| 0,25 | | | 7,0 | 10,0 |
| 0,30 | | | 5,8 | 9,0 |
+------------+-----------+-----------+-----------+---------------+
| 0,35 | 4,0 | 2,0 | 10,0 | 15,0 |
| 0,40 | | | 8,8 | 12,0 |
| 0,45 | | | 7,8 | 11,0 |
| 0,50 | | | 7,7 | 11,0 |
+------------+-----------+-----------+-----------+---------------+
| 0,55 | 6,0 | 3,0 | 9,6 | 15,0 |
| 0,60 | | | 8,8 | 12,0 |
| 0,65 | | | 8,1 | 12,0 |
| 0,70 | | | 7,5 | 11,0 |
| 0,75 | | | 7,0 | 10,5 |
| 0,80 | | | 6,0 | 9,0 |
L------------+-----------+-----------+-----------+----------------
Объем пробы и разведение выбраны с таким расчетом, чтобы
наркотин проявлялся только при содержании более 20% от морфина.
Для обнаружения наркотолина и наркотина на стартовую линию
хроматографической пластинки с нейтральным слоем силикагеля
наносят три порции исследуемого извлечения, а также 0,01 мл
раствора стандартных образцов алкалоидов, как указано на схеме
(рис. 1).
Рис. 1. Хроматограмма экстракта маковой соломы
--------T-------T--------
| | | () () | 6
| | | () () | 5
| () | () | () | 4
| | | |
| | | () () | 3
| | | |
| | | () () | 2
| | | |
| () () | () () | () () | 1
+-()----+-()----+-()----+
| а б | в г | д е |
L-------+-------+--------
Система толуол - ацетон - этанол - аммиак (25%) (45:45:6:2).
Пластинки многоразовые полимерные "Сорбил" или стеклянные
производства различных фирм: 1 - морфин, 2 - кодеин, 3 - тебаин, 4
- наркотолин, 5 - папаверин, 6 - наркотин; а, в, д - испытуемые
растворы; б, г, е - растворы стандартных образцов.
Пятна подсушивают в токе холодного воздуха, после чего
пластинку хроматографируют восходящим способом в системе
растворителей толуол - ацетон - этанол - аммиак (25%) (45:45:6:2).
После прохождения фронта растворителя до конца пластинки ее сушат
под тягой в течение 20 мин., закрывают стеклом зону "д-е", а
оставшуюся часть опрыскивают свежеприготовленным 0,1% водным
раствором прочного синего Б. Все проявленные пятна обводят
карандашом и немедленно записывают их окраску. Через 15 мин.
отмечают возможные изменения окраски пятен, закрывают стеклом зону
"а-б", зону "д-е" открывают и опрыскивают пластинку
концентрированным реактивом Драгендорфа. Все проявленные пятна
обводят карандашом и фиксируют изменение окраски пятен ранее
обнаруженных веществ. На хроматограммах "а" и "в" могут проявиться
пятна наркотолина с величиной Rf, около 0,64. Окраска наркотолина
с прочным синим Б вначале фиолетовая, а после проявления реактивом
Драгендорфа - синяя. Остальные пятна на хроматограмме "в" после
проявления реактивом Драгендорфа сливаются с фоном. На
хроматограмме "д" небольшое пятно наркотолина располагается
непосредственно под пятном папаверина. Наличие четкого пятна
наркотолина позволяет отнести объект к масличному маку.
Если наркотолин в образце не найден, то отмечают присутствие
наркотина. Если наркотин в пробе не обнаружен, объект относят к
масличному маку.
При четком обнаружении наркотина и полном отсутствии
наркотолина образец относят к опийному маку.
Обнаружение ретикулина (проводится для отнесения образца к
украинским сортам мака масличного, если в этом есть
необходимость).
На пластинку с нейтральным слоем сорбента наносят две порции
извлечения, пятна подсушивают в токе холодного воздуха, а затем
хромотографируют в системе хлороформ - изопропанол - аммиак (25%)
(30:10:0,8). После окончания хроматографирования пластинку сушат в
течение 30 мин., хроматограммы зоны "а-б" закрывают стеклом и
опрыскивают 0,5% спиртовым раствором едкого натра, а затем 0,1%
спиртовым раствором прочного синего Б. Затем стеклом закрывают
хроматограммы зоны "в-г", хроматограммы зоны "а-б" открывают и
опрыскивают пластинку реактивом Драгендорфа. Зона ретикулина
располагается между зонами морфина и кодеина. Остальные алкалоиды
выходят выше кодеина (рис. 2).
Рис. 2. Хроматограмма экстракта маковой соломы
-------------T-------------
| () () | |}
| () () | |}
| () | |} 4
| () | |}
| | |
| () () | | 3
| | |
| () | () | 2
| | |
| () () | () () | 1
+---()-------+---()-------+
| а б | в г |
L------------+-------------
Система хлороформ - изопропанол - аммиак (25%) (30:10:0,8).
Пластинки многоразовые, стеклянные производства различных фирм: 1
- морфин, 2 - ретикулин, 3 - кодеин, 4 - остальные алкалоиды опия;
а, в - испытуемые растворы; б, г - растворы стандартных образцов.
Следует отметить, что для хроматографирования согласно
вышеизложенной методике должны применяться пластины, не содержащие
в качестве связующего крахмал, т.е. не темнеющие при опрыскивании
реактивом Драгендорфа. Этим условиям отвечают стеклянные пластины,
производимые в Эстонии, пластины Merck 60 и 25 и отечественные
пластинки "Сорбфил" на стеклянной или полимерной основе.
ОЦЕНКА РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ И ФОРМИРОВАНИЕ ВЫВОДОВ
С целью полного расследования и правильной квалификации
правонарушений, связанных с посевом и выращиванием
наркотикосодержащих растений, на разрешение экспертизы ставится
вопрос: к какому виду относится произраставшее на участке
(указывается место изъятия) растение и является ли оно
наркотикосодержащим?
Для полного ответа на вопрос в отношении растений рода мак
необходимо выявить анатомо - морфологические признаки растения мак
(наличие и особенности стебля, листьев, коробочек, наружную и
внутреннюю эпидерму, части сосудистопроводящей системы, млечники,
пыльцевые зерна и т.п.), наличие основных алкалоидов опия:
морфина, кодеина и тебаина (содержание морфина и кодеина
превалирует над содержанием тебаина). На этом этапе эксперт
устанавливает принадлежность растений к снотворному маку. Далее
необходимо оценить содержание двух алкалоидов - наркотолина и
наркотина. При этом возможны три варианта:
- наличие в растительном объекте наркотолина служит
достаточным основанием для вывода: представленное на исследование
растение является маком масличным;
- при отсутствии на хроматограмме зоны наркотолина обращают
внимание на зону наркотина: если в растительном объекте наркотин
присутствует (при указанных условиях разведения), то делается
вывод: представленное на исследование растение является маком
опийным;
- при отсутствии на хроматограмме как зоны наркотолина, так и
зоны наркотина растение также относят к маку масличному.
Наличие в растительном объекте алкалоида ретикулина является
дополнительным признаком принадлежности данного растительного
объекта к маку масличному.
Следует иметь в виду также, что сырье, длительно хранившееся
во влажном состоянии, может резко отличаться по компонентному
составу от сырья, свежесобранного или высушенного в оптимальных
условиях. Поэтому растительное сырье, имеющее признаки загнивания
(побурение, плесень и т.д.), использовать для проведения
исследования нельзя.
Приготовление раствора стандартных образцов алкалоидов 0,05 г
морфина - основания, 0,025 г кодеина - основания, 0,01 г
папаверина и 0,01 г наркотина растворяют в 25 мл смеси метанола с
хлороформом в соотношении 3:1.
Приготовление реактива Драгендорфа
Раствор 1: 0,85 г нитрата висмута основного растворяют в 40 мл
воды и 10 мл уксусной кислоты.
Раствор 2: 20 г йодида калия растворяют в 50 мл воды.
Смешивают равные объемы растворов 1 и 2. К 40 мл смеси добавляют
30 мл уксусной кислоты и 100 мл воды.
|
